miRNA：诊断活动性结核病的潜在生物标志物研究

结核病（TB）是由结核分枝杆菌（Mt b）引起的一种常见传染病，对全球公共卫生构成严重威胁。当前诊断方法存在敏感性和特异性不足的问题。微小RNA（miRNA）作为调控基因表达的关键因子，在结核病的诊断和治疗中显示出巨大潜力。本研究通过生物信息学分析，筛选并验证了与活动性结核病相关的miRNA，旨在发现新的诊断生物标志物。

结核病在全球范围内仍是主要的公共卫生问题之一。尽管现有诊断手段不断进步，但早期诊断和治疗评估仍面临挑战。miRNA作为内源性非编码小RNA，通过调控宿主与病原体相互作用参与结核病的进程。本研究聚焦于miRNA在活动性结核病中的表达差异，探讨其作为诊断标志物的可能性。

实验方法

本研究采用生物信息学分析结合实验验证的方法，筛选和验证与活动性结核病相关的miRNA。

实验仪器与耗材

• 计算机及生物信息学软件
• 反转录定量实时PCR (qRT-PCR) 系统
• miRNA分离试剂盒
• TaqMan MicroRNA Reverse Transcription Kit
• mi DETECT ATrack 150TM miRNA qRT-PCR Starter Kit
• NanoDrop 分光度计
• 细胞制备管 (CPTs)

实验步骤

1. 利用生物信息学工具筛选结核病相关的miRNA和mRNA表达数据集。
2. 通过功能注释和富集分析，确定与结核病相关的生物学过程和通路。
3. 构建miRNA与靶基因之间的调控网络。
4. 从筛选结果中选取8个miRNA进行qRT-PCR验证。
5. 收集活动性结核病患者和健康对照组的外周血样本。
6. 使用miRNA分离试剂盒从外周血单核细胞中提取RNA。
7. 使用NanoDrop分光度计测定RNA纯度。
8. 进行qRT-PCR分析，评估miRNA的表达差异。

实验结果

• 筛选出7463个差异表达的mRNA和38个差异表达的miRNA。
• 功能注释确定MAPK信号通路和白细胞迁移过程的富集。
• 3个miRNA（miR-892b、miR-199b-5p和miR-582-5p）在活动性结核患者和健康对照组中表达差异显著。
• miR-892b在诊断活动性结核中展现出最佳的整体性能（AUC=0.82）。

实验讨论及展望

本研究通过生物信息学分析和实验验证，揭示了miRNA在活动性结核病中的潜在作用。miR-892b可能作为结核病的诊断性生物标志物。未来研究将进一步探讨miR-892b在结核病进展中的具体机制，以及其在临床诊断和治疗中的应用潜力。

miRNA的表达差异为活动性结核病的诊断提供了新的视角。特别是miR-892b，其在活动性结核患者中的低表达水平，提示了其作为诊断标志物的可能性。进一步的研究将有助于开发基于miRNA的结核病诊断新方法。