采用一步法快速鉴定皮肤癣菌的实验研究

本研究旨在探讨一步法快速鉴定皮肤癣菌的临床应用价值。采用一步法提取癣菌及非癣菌菌株DNA，利用皮肤癣菌通用引物CHS1进行PCR扩增，通过电泳检测特异性条带，评估引物的特异性和PCR体系的敏感性。所有癣菌菌株均显示特异性366 bp条带，非癣菌菌株及人DNA未显示条带。PCR体系的敏感性达到6 pg。皮肤癣菌通用引物CHS1具有高特异性，PCR体系展现出高敏感性，一步法快速鉴定皮肤癣菌具有潜在的临床应用价值。

皮肤癣菌是一类常见的浅表真菌感染病原体，能够引起皮肤、指甲和毛发等部位的感染。传统的癣菌诊断方法包括镜检和培养，但存在操作复杂、耗时长等局限性。随着分子生物学技术的发展，基于PCR的诊断方法因其快速、敏感和特异的特点而受到关注。本研究通过一步法提取DNA并利用特异性引物，旨在建立一种快速鉴定皮肤癣菌的方法。

实验仪器与耗材

• PCR仪(BIO-RAD)
• 霉菌培养箱(Blue pard)
• 生物安全柜(Healf orce利康)
• 分析天平(Sartorius)
• 电泳槽(北京市六一仪器厂)
• DNA凝胶成像仪(BIO-RAD)
• Colibri超微量分光光度计(Titertek-Berthold)
• 裂解缓冲液和中和液
• 沙保培养基(SDA)
• 试剂：panDerml和panDerm2引物(Invitrogen公司)，GoldStar Taq MasterMix(康为公司)

实验步骤

1. 菌株培养：将临床菌株接种于SDA培养基，30℃恒温培养2周。
2. DNA提取：采用一步法提取癣菌及非癣菌菌株DNA。
3. PCR扩增：使用CHS1特异性引物对提取的DNA进行PCR扩增。
4. 电泳检测：扩增产物通过2%琼脂糖凝胶电泳，EB染色进行检测。

实验结果

1. 特异性测试：65株癣菌菌株均产生特异性366 bp条带，非癣菌菌株和人DNA未产生条带。
2. 敏感性测试：PCR体系对癣菌DNA的敏感性达到6 pg。
3. 一步法快速鉴定皮肤癣菌的方法为临床提供了一种高特异性和高敏感性的分子诊断手段，具有重要的临床应用潜力。
   

实验讨论及展望

本研究通过一步法快速鉴定皮肤癣菌，结果表明该方法具有较高的特异性和敏感性。该技术有望简化临床皮肤癣菌的诊断流程，提高诊断效率。未来研究将进一步优化实验条件，探索一步法在临床样本中的应用，并评估其在大规模样本检测中的可行性和准确性。