超微量分光光度计在提取牡丹基因组DNA及ISSR引物筛选研究中的应用

本研究采用改良的CTAB法从成熟干燥的牡丹叶片中提取基因组DNA，并通过琼脂糖凝胶电泳法和超微量分光光度计法对DNA质量进行检测。利用优化的ISSR-PCR反应体系，对220条ISSR引物进行筛选，最终选出12条适合牡丹的高多态性、高重复性引物。研究结果表明，改良的CTAB法适用于从蛋白质和酚类物质含量高的植物材料中提取基因组DNA，为牡丹遗传多样性研究和DNA鉴定提供了有效方法。

牡丹作为中国传统名花，具有丰富的遗传多样性和重要的药用价值。然而，牡丹基因组DNA的提取和ISSR引物的筛选一直是研究中的难点。本研究旨在通过改良的CTAB法提高DNA的提取效率和质量，并通过ISSR引物筛选为牡丹遗传多样性分析提供分子标记。

实验方法：

1. DNA提取：采用改良的CTAB法从牡丹叶片中提取基因组DNA。
2. DNA质量检测：使用琼脂糖凝胶电泳法和超微量分光光度计法对DNA纯度和浓度进行检测。
3.  ISSR-PCR反应体系优化：对PCR反应体系中的各种成分进行优化，以获得最佳的扩增效果。
4. ISSR引物筛选：通过温度梯度模式筛选出适合牡丹的ISSR引物。

实验仪器与耗材：

• 手提式压力蒸汽灭菌器
• 电热鼓风干燥箱
• 高通量组织研磨机
• 电子天平
• 离心机
• 电泳仪
• 全自动多色荧光及化学发光凝胶成像系统
• 数显恒温振荡器
• 梯度PCR仪
• 超微量分光光度计
• 琼脂糖、CTAB、EDTA、三氯甲烷、异戊醇、乙酸乙酯、β-巯基乙醇等试剂

实验步骤：

1. 牡丹叶片的采集与干燥处理。
2. 使用改良CTAB法提取基因组DNA。
3.  利用超微量分光光度计测定DNA浓度和纯度。
4. 通过琼脂糖凝胶电泳法验证DNA完整性。
5. 优化ISSR-PCR反应体系，进行温度梯度筛选。
6. 使用筛选出的ISSR引物对牡丹DNA进行PCR扩增。

实验结果：

1. 提取的DNA浓度范围在30-100 ng/μL，纯度比值在1.7-1.9之间。
2. 从220条ISSR引物中筛选出12条适用于牡丹的引物，具有清晰的扩增条带和高多态性。

实验讨论及展望：

改良的CTAB法在提取牡丹基因组DNA方面表现出较高的效率和质量，适用于蛋白质和酚类物质含量高的植物材料。筛选出的ISSR引物为牡丹遗传多样性分析和DNA鉴定提供了有效工具。未来研究将进一步利用这些引物对牡丹种质资源进行遗传多样性分析，为牡丹的保护和利用提供科学依据。